Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的更进一步中逐渐扩展

从第一次注意到呼吸道自身血清到注意到1M-高血压临床症状的令人满意数万人在学龄前时期就有更好的描绘出，多个呼吸道自身血清无症状的学龄前中的有70%在血清类比后10年底患上高血压，而随访15年的学龄前这一比重减低到84%。来得之下，占临床1M-高血压一半以上的M-1M-高血压的中风机制还没有人赢取充分的科学研究。

更为多的人开始用于分阶段的系统来假设1M-高血压的令人满意：形态在注意到多种呼吸道自身血清时转回第1过渡期，注意到血糖所致时转回第2过渡期，注意到症状时转回第3过渡期。一些多发呼吸道自身血清无症状的形态，在1期和2期，令人满意较很慢，并发展为中风的1M-高血压。我们此前描绘出了三第三组在首次侦测到多种呼吸道自身血清比对后至近于多10年无高血压的近于很慢令人满意者，这第三组病症人数近于多，但特质非常明确。随后，我们发现呼吸道自身蛋白质特异性CD8+T支线粒体质子化在令人满意快速的病症中的必需不发挥作用，但在更进一步中风和长期发挥作用的高血压病症中的很较难侦测到。这可能表明，与令人满意病症来得，这些病症诱发质子化的恒定减弱。

早期科学研究表明，尽管恒定性T支线粒体(Treg)需求量正常，但高血压病症发挥作用一些功能缺陷，其中的包括对IL-2的质子化意志力减低。此外，高血压病症中的的物理现象CD4+T支线粒体可能对恒定更具抵抗性，平庸为物理现象T支线粒体的抑止减弱，自然产生的Treg和活体产生的可借Treg，以及蛋白质经历的CD4+T支线粒体中的IL-2质子化减弱。本科学研究的旨在是描绘出了CD4+恒定性T支线粒体(Treg)在一小群近于快速令人满意者中的的特质，他们的平均年长为43岁(31-72岁)，随访小时为18-32年。

方法：BOX科学研究是一项以人群辅以的横向科学研究，在21岁以下住院的病症亲属中的检查1M-高血压的危险因素。我们此前描绘出了长期快速令人满意者的特质，他们保持多重呼吸道自身血清无症状将近10年，但没有人注意到高血压的临床症状，很慢性或非完成性诱发。随后，10名在此期间保持无高血压并不愿包括大量体内比对的快速令人满意者纳入T和B支线粒体功能分析。在目前的科学研究中的，8名很慢令人满意者(SP第三组)，中的位年长43岁(31-72岁)，18 - 32岁之间的呼吸道自身血清无症状。所有的参与者都东南面1M-高血压令人满意的1期，尽管一些人随后失去了呼吸道自身血清对某些蛋白质的抽血，然而，一名病症已经东南面2期至近于多6年，但没有人注意到临床症状，一名病症被诊断为高血压，该受试者72岁，在通过观察实验比对时，其HbA1c升高到53 mmol/mol(7%)，在数据分析中的对该可借完成了单独审核。受控外周血单个核支线粒体(PBMCs)，采用多表达式流式支线粒体法术和T支线粒体抑止试验审核可借中的Treg的频数万人、表M-和功能。用于FlowSOM和CITRUS(聚类解剖、表征和复不止)完成无监督聚类分析，审核Treg表M-。

结果：与健康可借来得，来自很慢令人满意体的梦境CD4+T支线粒体的监督聚类推测，激已逝的梦境CD4+ Treg频数万人减低，与糖皮质激素可借的TNFR相关蛋白(GITR)表述减低有关。一名HbA1c升高的病症与令人满意快速者和也就是说的对照第三组来得，Treg对光有所各不相同。功能已经有，与健康可借来得，来自快速令人满意体的Treg细胞内的CD4+物理现象T支线粒体抑止明显损坏。平庸为对物理现象CD4+T支线粒体CD25和CD134表述的抑止减低。

示意图1 深入的表M-分析推测，CD4+Treg亚M-在很慢令人满意函数调用中的减低。由FlowSOM填充的Treg室，聚集在来自所有可借的已逝CD4+CD45RA -支线粒体上。根据标示出物表述解剖不止10个元簇:梦境T支线粒体_1;梦境T cell_2;梦境T cell_3;梦境T cell_4;CD49b梦境T支线粒体;HLA-DR + GITR +梦境T支线粒体;支线程Treg_1;支线程Treg_2;支线程Treg_3;和支线程Treg_4。(a)用于9个各不相同Treg标示出填充的10个元簇的MST。每个数据流代表一个空降兵(100个空降兵)，很大的元空降兵(10个元空降兵)在数据流第三组周围着色。每个数据流中的的饼示意图声称单个标示出的表述最高级别。(b)每个元聚类的热示意图，以推测整体标示出表述。(c, d)为HD第三组(c)和SP第三组(d)填充示意图，以及FlowSOM识别的每个元簇的覆盖层。(e-l)相对同位素为每个metacluster箱子支线示意图(同位素> 0.05%)考虑到为HD和SP第三组:支线程Treg_2 (e),支线程Treg_3 (f),支线程Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +梦境T支线粒体(h)、梦境T cell_1(i),梦境T cell_2 (j),梦境T cell_3 (k) n d CD49b梦境T支线粒体(l)。浅蓝色带子代表**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩筛选。此键适用于示意图形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

示意图2 用于CITRUS的预测模M-证实，Treg频数万人的减低是令人满意快速的标志。最高级别门控(a - f)和水果分析(g-k)来得SP参与者和也就是说的HD参与者在CD4+CD45RA−T支线粒体上的差异。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群体的代表性示意图。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR表述完成受控，模拟器FlowSOM群体。(b) HD(黑点)和SP(蓝点)第三组以及可借SP 606(浅蓝色)中的CD25+ cd127的频数万人汇总示意图。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+门控子集的箱子支线示意图;(c) HLA-DRloGITR−(支线程Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(支线程Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(支线程Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+支线程T cell)。(g - i)柑橘簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3表述强度着色，箭头突不止的簇被识别为SP和HD函数调用之间的各不相同。(j)箱子支线示意图推测了在SP(蓝点)和HD(灰点)第三组中的，CITRUS梦境Treg_3和Treg_4的相对同位素(比重)。(k)直方示意图推测每个簇的表M-(粉红色)和Treg标示出相对表述与文化背景表述(蓝色);上列，支线程Treg_3;下面一行，支线程Treg_4。文化背景与所有其他簇中的标示出的表述有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩筛选

示意图3 与健康献血者来得，令人满意快速者梦境treg的GITR减低。每个梦境CD4+T支线粒体元簇(梦境T支线粒体_1;梦境T cell_2;梦境T cell_3;CD49b +梦境T支线粒体;HLA-DR + GITR +梦境T支线粒体;支线程Treg_2;支线程Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)侦测每个表述标示出的发生变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)函数调用的表述热示意图(sp606不包括在内)。(c,d)梦境Treg_4元簇中的所有HD(棕色)、所有SP(蓝色)和SP 606(浅蓝色)的FlowSOM GITR表述串联，推测直方示意图(c)和汇总示意图(d)。Wilcoxon配对符号秩和筛选，p< 0.07(浅蓝色)所有可借包括，p< 0.05(蓝色)可借SP 606和也就是说的HD不包括在测试中的。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs中的GITR表述，从最高级别门控，从所有HD(棕色)、所有SP(蓝色)和SP 606(浅蓝色)串联，推测直方示意图(e)和汇总示意图(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对符号秩筛选

示意图4 来自快速令人满意的CD4+ treg支线粒体控制物理现象CD4+T支线粒体的意志力减低。SP第三组用蓝色的支线和带子声称，HD第三组用红色的支线和带子声称，浅蓝色的支线/带子声称可借sp606。用于CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T支线粒体完成分选。CD4+CD25−(；也者)被标示出为CFSE, Treg按掩蔽的比重滴定。用抗CD3 /28微珠已逝化支线粒体，培育不止3天后完成流式支线粒体法术侦测。(a-d)与CD4+；也者相对应的treg培育不止(骨髓)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD；也者培育不止。(a,b,f) CFSE细胞分裂(a,e)和CFSE抑止%-(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的抑止%-。用于无症状对照(激已逝的响应支线粒体不含treg)推算抑止%-。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重来得测试

示意图5 物理现象CD4+T支线粒体对快速令人满意的T支线粒体已逝化的抑止更敏感。SP第三组用蓝色的支线和带子声称，HD第三组用红色的支线和带子声称，浅蓝色的支线/带子声称可借sp606。用于CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T支线粒体完成分选。CD4+CD25−(；也者)被cfsel标示出，treg按掩蔽的比重滴定。用抗CD3 /28微珠已逝化支线粒体，培育不止3天后完成流式支线粒体法术(CD25反染)和支线粒体因子分析。HD Treg与HD、SP或sp606；也者协同培育不止。(a,b) CFSE细胞分裂(a)和CFSE抑止三份(b)。(c,d) CD25抑止三份(c)和CD134抑止三份(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共培育不止中的的表述。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重来得测试

结论：我们得不止的结论是，来自快速令人满意子的已逝化梦境CD4+Treg在GITR表述中的赢取了扩充和独特，强调了进一步科学研究Treg在1M-高血压风险形态中的的异质性的必要性。

原文不止处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28