Diabetologia：诱导但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次显现出呼吸道自身抗质到显现出1改进型肝炎医学疼痛的的持续发展百余人在儿童时代就有很好的描绘出，多个呼吸道自身抗质白血病的儿童前有70%在肝脏转换后10年内患上肝炎，而随访15年的儿童这一数目增高到84%。比起之下，%医学1改进型肝炎一半以上的改进型1改进型肝炎的得病机制还没有获得充分的集中研究。

更加多的人开始常用依此管理系统来定义1改进型肝炎的的持续发展：个质在显现出多种呼吸道自身抗质时重回第1过渡阶段，显现出血糖异常时重回第2过渡阶段，显现出疼痛时重回第3过渡阶段。一些多发呼吸道自身抗质白血病的个质，在1期和2期，的持续发展较快，并持续发展为得病的1改进型肝炎。我们前描绘出了一第各别在首次样品到多种呼吸道自身抗质取样后至少10年无肝炎的极快的持续发展者，这第各别病患总数少，但形态非常明确。随后，我们见到呼吸道自身复合物特异性CD8+T巨噬细胞重排在的持续发展减快的病患前基本不共存，但在近期得病和近十年共存的肝炎病患前很容易样品到。这似乎确实，与的持续发展病患比起，这些病患神经性重排的调节增强。

20世纪集中研究确实，尽管调节性T巨噬细胞(Treg)总数经常性，但肝炎病患共存一些特性不足之处，其前还包括对IL-2的重排能力下降。此外，肝炎病患前的畸变CD4+T巨噬细胞似乎对调节更具抵抗性，展现出为畸变T巨噬细胞的诱发弱化，自然消除的Treg和质外消除的抑制Treg，以及复合物经历的CD4+T巨噬细胞前IL-2重排弱化。本集中研究的意在是描绘出了CD4+调节性T巨噬细胞(Treg)在海岸边极减快的持续发展者前的形态，他们的平均成年人为43岁(31-72岁)，随访等待时间为18-32年。

工具：BOX集中研究是一项以年轻人依此的平行集中研究，在21岁以下确诊的病患亲属前检查1改进型肝炎的危险考量。我们前描绘出了近十年减快的持续发展者的形态，他们保有多重呼吸道自身抗质白血病超过10年，但没有显现出肝炎的医学疼痛，快性或非顺利进行性神经性。随后，10名继续保有无肝炎并情愿提供者大量血液取样的减快的持续发展者纳入T和B巨噬细胞特性量化。在目前的集中研究前，8名快的持续发展者(SP第各别)，前位成年人43岁(31-72岁)，18 - 32岁错综复杂的呼吸道自身抗质白血病。所有的组织者都受制于1改进型肝炎的持续发展的1期，尽管一些人随后失去了呼吸道自身抗质对某些复合物的白血病重排，然而，一名病患仍未受制于2期至少6年，但没有显现出医学疼痛，一名病患被诊断为肝炎，该受试者72岁，在捕获试验取样时，其HbA1c上升到53 mmol/mol(7%)，在数据量化前对该供质顺利进行了单独评估。复合外周血单个连锁反应巨噬细胞(PBMCs)，采用多参数流式巨噬细胞术和T巨噬细胞诱发试验评估供质前Treg的频百余人、基因改进型和特性。常用FlowSOM和CITRUS(聚类鉴定、表征和回归)顺利进行无行政官员聚类量化，评估Treg基因改进型。

结果：与有益供质比起，来自快的持续发展质的心灵CD4+T巨噬细胞的行政官员聚类看出，触发的心灵CD4+ Treg频百余人增高，与糖皮质激素抑制的TNFR具体蛋白(GITR)表达出来增高有关。一名HbA1c上升的病患与的持续发展减快者和最简单的对照第各别比起，Treg谱相同。特性量化确实，与有益供质比起，来自减快的持续发展质的Treg介导的CD4+畸变T巨噬细胞诱发轻微受损。展现出为对畸变CD4+T巨噬细胞CD25和CD134表达出来的诱发增高。

示意图1 集中的基因改进型量化看出，CD4+Treg变异在快的持续发展队列前增高。由FlowSOM分解的Treg室，聚集在来自所有供质的活CD4+CD45RA -巨噬细胞上。根据标有物表达出来鉴定出10个元簇:心灵T巨噬细胞_1;心灵T cell_2;心灵T cell_3;心灵T cell_4;CD49b心灵T巨噬细胞;HLA-DR + GITR +心灵T巨噬细胞;缓存Treg_1;缓存Treg_2;缓存Treg_3;和缓存Treg_4。(a)常用9个多种不同Treg标有分解的10个元簇的MST。每个结点都有一个坦克部队(100个坦克部队)，大得多的元坦克部队(10个元坦克部队)在结点第各别周遭制做。每个结点前的碗示意图指出单个标有的表达出来高级别。(b)每个元聚类的热示意图，以看出整质标有表达出来。(c, d)为HD第各别(c)和SP第各别(d)分解示意图，以及FlowSOM辨别的每个元簇的裂口。(e-l)比较连锁反应素为每个metacluster箱该线示意图(连锁反应素> 0.05%)确定为HD和SP第各别:缓存Treg_2 (e),缓存Treg_3 (f),缓存Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +心灵T巨噬细胞(h)、心灵T cell_1(i),心灵T cell_2 (j),心灵T cell_3 (k) n d CD49b心灵T巨噬细胞(l)。橙色带子都有理应SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对大写秩化验。此键适用于示意图形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

示意图2 常用CITRUS的预测模改进型声称，Treg频百余人的增高是的持续发展减快的标志。分级门控(a - f)和柑橘量化(g-k)比较SP组织者和最简单的HD组织者在CD4+CD45RA−T巨噬细胞上的差异。(a)杂交CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群质的民族特色示意图。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富含，然后通过HLA-DR和GITR表达出来顺利进行复合，模拟FlowSOM群质。(b) HD(黑点)和SP(布氏)第各别以及供质SP 606(橙色)前CD25+ cd127的频百余人摘要示意图。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+门控弟集的箱该线示意图;(c) HLA-DRloGITR−(缓存Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(缓存Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(缓存Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+缓存T cell)。(g - i)柑桔簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3表达出来切变着色，交叉出彩的簇被辨别为SP和HD队列错综复杂的多种不同。(j)箱该线示意图看出了在SP(布氏)和HD(灰点)第各别前，CITRUS心灵Treg_3和Treg_4的比较连锁反应素(数目)。(k)直方示意图看出每个簇的基因改进型(白色)和Treg标有比较表达出来与背景表达出来(浅蓝色);上列，缓存Treg_3;上面一行，缓存Treg_4。背景与所有其他簇前标有的表达出来有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对大写秩化验

示意图3 与有益献血者比起，的持续发展减快者心灵treg的GITR增高。每个心灵CD4+T巨噬细胞元簇(心灵T巨噬细胞_1;心灵T cell_2;心灵T cell_3;CD49b +心灵T巨噬细胞;HLA-DR + GITR +心灵T巨噬细胞;缓存Treg_2;缓存Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)样品每个表达出来标有的变动。(a,b)来自HD (a)和S (b)队列的表达出来热示意图(sp606不还包括在内)。(c,d)心灵Treg_4元簇前所有HD(灰色)、所有SP(浅蓝色)和SP 606(橙色)的FlowSOM GITR表达出来串联，看出直方示意图(c)和摘要示意图(d)。Wilcoxon配对大写秩和化验，p< 0.07(橙色)所有供质还包括，p< 0.05(浅蓝色)供质SP 606和最简单的HD不还包括在测试前。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs前GITR表达出来，从分级门控，从所有HD(灰色)、所有SP(浅蓝色)和SP 606(橙色)串联，看出直方示意图(e)和摘要示意图(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对大写秩化验

示意图4 来自减快的持续发展的CD4+ treg巨噬细胞掌控畸变CD4+T巨噬细胞的能力下降。SP第各别用浅蓝色的该线和带子指出，HD第各别用白色的该线和带子指出，橙色的该线/带子指出供质sp606。常用CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T巨噬细胞顺利进行分选。CD4+CD25−(这样的话者)被标有为CFSE, Treg按观察的数目校准。用抗CD3 /28微珠再造巨噬细胞，培训3天后顺利进行流式巨噬细胞术样品。(a-d)与CD4+这样的话者比较应的treg培训(自质)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD这样的话者培训。(a,b,f) CFSE游离(a,e)和CFSE诱发百份(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的诱发百份。常用白血病对照(触发的拥护巨噬细胞不含treg)计数诱发百份。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差量化。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

示意图5 畸变CD4+T巨噬细胞对减快的持续发展的T巨噬细胞再造的诱发更敏感。SP第各别用浅蓝色的该线和带子指出，HD第各别用白色的该线和带子指出，橙色的该线/带子指出供质sp606。常用CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T巨噬细胞顺利进行分选。CD4+CD25−(这样的话者)被cfsel标有，treg按观察的数目校准。用抗CD3 /28微珠再造巨噬细胞，培训3天后顺利进行流式巨噬细胞术(CD25反染)和巨噬细胞因弟量化。HD Treg与HD、SP或sp606这样的话者协同培训。(a,b) CFSE游离(a)和CFSE诱发百分百余人(b)。(c,d) CD25诱发百分百余人(c)和CD134诱发百分百余人(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共培训前的表达出来。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差量化。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

结论：我们得出的结论是，来自减快的持续发展弟的再造心灵CD4+Treg在GITR表达出来前获得了扩张和比较丰富，阐释了更进一步集中研究Treg在1改进型肝炎风险个质前的值得注意的必要性。

原文典故：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28